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发酵罐灭菌操作说明

罐内的温度逐渐上升，至所设置90°温度时，搅拌电机停止转动，此时打开罐体总进气阀，打开罐体出气管阀，依次打开以下阀门：打开出气调节阀，缓慢打开罐 体进蒸汽阀对罐内通入蒸汽，空气滤器表压开始上升，超过0.1MP时打开冷凝水阀门疏水，继续开大罐体进蒸汽阀，除尽罐内空气后，罐内压缓慢上升，调整出 气调节阀，使之达到灭菌所要求温度压力，达到灭菌温度时计时开始。

调整夹套进气阀、罐体进蒸汽阀和出气调节阀，使温度、罐压保持所设温度。灭菌时间到后，依次关闭已开的各进汽阀门，关闭蒸汽总阀门，完全放开罐内尾气排气 阀放掉罐内压力，关闭蒸汽发生器电源。打开空气压缩机，等罐压降至0.05MP时，缓慢打开进气调节阀，维持罐内正压。

灭菌过程中，操作员应穿长衣长裤，带防护手套，防止烫1伤。灭菌过程中如果蒸汽发生器自动进水，蒸汽总压将迅速下降，必要时可以适当开大蒸汽总阀门，保持压 力，但要小心观察压力变化。对罐内通蒸汽时，灭菌后罐压下降较快，注意通无菌空气时机。尽量不要使空气压缩机和蒸汽发生器同时工作。灭菌过程中空气滤器压 力不应超过0.2MP。冷凝水的大小将影响罐内液体灭菌后浓度，要考虑蒸汽冷凝水增加量。

常见的发酵罐冷却装置的结构及特点

发酵过程中产生的发酵热会造成发酵液温度升高，影响发酵的正常进行，因此发酵过程中必须有冷却装置来控制温度。发酵罐的冷却装置多种多样，常见的有以下几种：

a．夹套式冷却装置：结构简单，易于制造，罐内无冷却设备，死角少，易进行清洁灭菌，有利于发酵。但因传热壁较厚，冷却介质流速低，传热系数较低，降温效果差。这种冷却装置应用于容积较小的发酵罐、种子罐，夹套的高度比静止液面高度稍高。

b．竖式蛇管冷却装置：竖式的蛇管分组安装于发酵罐内，有四组、六组、八组不等。传热系数高，管内冷却水流速高，传热系数为1200~4100kj/(m2.h.℃)，用水量较少，但清洗不方便。多用于容积在5m3以上的罐，适用于冷却水温度较低的地区。对于水温高的地区则发酵时降温困难，必须采用冷冻盐水或冷冻水冷却，增加了设备***及生产成本。

c．竖式列管冷却装置：这种装置在罐内分组装有多根列管，适用于气温较高、水源充足的南方地区。其管内水流速快，加工方便，对于机械搅拌罐列管式可充当挡板。但用水量大，传热系数较蛇管低，一般为1260～1880kl/m2.h.℃）。

d．罐外冷却设备：在发酵过程中把发酵液引出，进入外部冷却设备冷却再回发酵罐发酵，即为罐外冷却。这种形式死角少，清洗、维修方便，冷却较均匀，但必须添加泵来完成。

发酵罐接种前的准备工作：

一，准备工具：

1，把长势良好的摇瓶，菌球数量80-90%方可使用，75%的酒精棉

2，酒精喷壶，加入75%的酒精。

3，摄子，棉花，95%酒精，火机或火柴，水盆加入半盆清水，棉线手套两，开接种口盖所需要的撬棍钳子之类的用具。根据操作方便而准备不同用具。

4，将上述用品，器具放入液体***培养室相应位置，先所有使用工具用75%酒精棉擦拭消毒处理。

二，对发酵培养室进行消毒处理，消毒处理方法如下：

1，用二1氯1异1qing1尿1酸纳或高1锰1酸1钾加甲醛溶液常规消毒1***进行30分钟密闭薰蒸处理。

2，用臭氧机加紫外线灯照射30分钟对液体***培养发酵室空间消毒处理。

3，使用是100级以上空气净化设备对液体***培养发酵室进行空气净化处理30分钟。上述方法可以任选其一，如果能交差使用效果更好。

接种流程

1，接种人员以缓冲间更换工作服，戴好防尘帽，口罩进入已经做好消毒处理的液体***发酵培养室，先用75%的酒精喷壶对空间进行喷雾降尘消毒处理。

2，将棉花搓成长33厘米直径1厘米粗的棉绳（根据接种口周长而定棉绳长度），用95%酒精浸泡湿透，再将棉绳缠绕至接种口周围，要求缠紧，系劳，不要缠在接种口封盖上。缠好棉绳以后点燃棉绳，使接种口周围形成一个酒精火焰保护圈。

3，带好双层棉线手套，放到凉水内沾湿手套，然后将发酵罐排气阀开大，当罐内压力降到到接近0时迅速用撬棍或钳子将接种口封盖打开，另一只手关闭发酵罐排气阀，使罐内压力从接种口排出，使罐内形成正压，以避免接种环节带入杂菌。

4，将接种口封盖向上放到一边，右手拿***三角瓶，将瓶口部倾斜至酒精火焰圈上部，倾斜角度以***瓶内液体不沾到棉塞为宜。然后旋转三角瓶，对瓶口部位灼烧消毒处理，30秒时间左右旋转5圈以后用左手将三角瓶棉塞旋转着缓缓取下，再将三角瓶内菌液倒入液体***发酵罐内。

5，放下***三角瓶，拿起接种口封盖，在酒精火焰圈灼烧消毒

处理5秒左右盖沿接种口，旋紧封盖，同时将排气阀微启到发酵罐压力保持在0·03即可。